TCC - Bacharelado em Ciências Biológicas (Sede)
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Item Análise da Influência do número de cópias na expressão do gene blaKPC(2021-03-05) Oliveira, Michelly Maria Pereira e; Almeida, Anna Carolina Soares; http://lattes.cnpq.br/4153747599532886As enterobactérias tem se destacado na prática clínica pela detecção de mecanismos enzimáticos que conferem resistência a antimicrobianos, destacando-se a Klebsiella pneumoniae carbapenemase (KPC) devido a sua rápida disseminação mundial ocasionada pela localização do gene blaKPC em grandes plasmídios transferíveis e transposons. A expressão do gene blaKPC pode ser afetadas por características intrínsecas do hospedeiro que o abriga ou número de cópias. Um fenótipo não usual foi observado em isolados clínicos de P. stuartii e M. morganii e seus respectivos transformantes, onde as células de E. coli receptoras de plasmídeos que carregavam o gene blaKPC, apresentaram valores de CIMs, para alguns beta-lactâmicos, maiores do que nos isolados clínicos. O objetivo deste trabalho foi analisar o número de cópias do gene blaKPC, relacionando-os com seus os respectivos CIMs. O DNA genômico dos isolados bacterianos foi extraído a partir do kit PromegaTM WizardTM Genomic DNA Purification conforme orientações do fabricante, e em seguida, foi quantificado por espectofotometria através do equipamento NanoDropTM Lite da Thermo Fisher Scientific. Os genes de controle endógenos foram escolhidos a partir da literatura depois de uma busca robusta, em seguida foram analisados in silico. Utilizando bancos de dados, softwares e outras ferramentas, os primers foram desenhados. Para a realização da quantificação absoluta, foi realizada uma estimativa baseada em uma proporção da relação quantitativa relativa entre alvo e o controle endógeno, utilizando a fórmula 2-ΔCq. Para os experimentos foi utilizando o equipamento SteponeTM Real-time PCR System (Applied Biosystems) e o corante SYBR Green PCR Master Mix (Applied Biosystems). Os primers desenhados passaram por uma etapa de validação visando avaliar sua eficiência (tufMm - 93.019, tufPs - 90.228 e tufKp - 103.474, ambos com R2próximos de 1). Os dados gerados pelos experimentos de qPCR absoluta foram associados com os distintos perfis fenotípicos observados e a partir dos ensaios foi determinado que o número de cópias do gene blaKPC para os isolados transformantes e para os isolados clínicos não variam significativamente, apontando que outro mecanismo deve estar interferindo na expressão do gene blaKPC, influenciando diretamente os níveis de resistência.Item Análise da suceptibilidade aos antimicrobianos em Pseudomonas spp. isoladas de produtos saneantes(2020-02-03) Vitor, Mizânia Cabral de Almeida; Almeida, Anna Carolina Soares; Souza, Paula Mariana Salgueiro de; http://lattes.cnpq.br/6281410502740086; http://lattes.cnpq.br/4891800920829895O objetivo deste trabalho foi avaliar diferentes tipos de produtos saneantes, identificando a presença de microrganismos oportunistas patogênicos, em especial Pseudomonas, e conhecer a suscetibilidade aos antimicrobianos. Foram coletadas amostras durante setembro de 2019 e janeiro de 2020 para isolamento de possíveis microrganismos patogênicos oportunistas e a partir destes, foram realizados testes com 7 antimicrobianos, sendo eles amicacina, ceftazidima, cefepime, gentamicina, imipenem, aztreonam e polimixina, através do método disco-difusão. Foram recuperadas 17 cepas ao longo do estudo, que apresentaram sensibilidade à maioria dos antimicrobianos citados. Uma das cepas de Pseudomonas spp., apresentou resistência a cefepime e três cepas apresentaram resistência a amicacina.Item Análise de mecanismos de resistência em bactérias clínicas oriundas de hospitais de Pernambuco(2021-02-17) Silva, Jonas de Melo Silvestre da; Almeida, Anna Carolina Soares; http://lattes.cnpq.br/4891800920829895; http://lattes.cnpq.br/9044602995334190A disseminação de bactérias resistentes ou superbactérias vem sendo considerada uma ameaça catastrófica para a saúde da população e representa um dos principais desafios na área da saúde em todo o mundo. O objetivo principal deste trabalho é a identificação dos determinantes genéticos, moleculares, mecanismos de resistência e a relação clonal entre vinte e dois isolados obtidos de dois hospitais de Pernambuco. Foram incluídos isolados de: Klebsiella pneumoniae, Klebsiella ozaenae, Escherichia coli e Enterobacter spp, onde todos apresentaram perfil fenotípico de resistência a multidrogas (MDR). Os isolados provenientes do Hospital Universitário da Universidade Federal do Vale do São Francisco apresentaram perfil de resistência mais alto em relação aos isolado do Hospital Universitário Oswaldo Cruz localizado em Recife, principalmente a aminoglicosídeos e cefalosporina 3º e 4º geração. Pela técnica de Reação em cadeia da polimerase (PCR) foi possível detectar pelo menos um dos genes resistência B-lactâmico a testados em todos os isolados, com exceção de 2 isolados que não apresentaram nenhum dos genes avaliados. O gene blaCTX-M foi o mais prevalente encontrado nesse estudo. E apesar de metade das amostras terem perfil de resistência a carbapenêmicos, o gene blaKPC foi o menos detectado. Além disso, pela análise de relação clonal através da técnica REP-PCR revelou uma possível endemicidade de um único tipo clonal na Unidade de Terapia Intensiva no Hospital Universitário Oswaldo Cruz localizado em Recife. Já no Hospital Universitário da Universidade Federal do Vale do São Francisco foi identificado estabelecimento de dois grupos clonais que estão disseminados a pelo menos 3 meses. A presença de bactérias multirresistentes em unidades hospitalares reforça a necessidade de estratégias para contenção de infecções e da disseminação desses patógenos, principalmente nas UTIs.Item Investigação do potencial antibiofilme da lectina de folhas de Schinus terebinthifolia Raddi contra Staphylococcus aureus(2019-12-20) Silva, Talyta Naldeska da; Pontual, Emmanuel Viana; Silva, Pollyanna Michelle da; http://lattes.cnpq.br/0563176148137978; http://lattes.cnpq.br/1777060469196142; http://lattes.cnpq.br/8762925956752737Biofilmes são comunidades microbianas complexas que têm sido associadas à incidência de infecções, inclusive no ambiente hospitalar. Sua formação é considerada um fator determinante da virulência em microrganismos e contribui fortemente para a resistência aos antimicrobianos convencionais. Nesse sentido tem crescido a busca por compostos de origem natural com atividade antimicrobiana que sejam mais efetivos e menos tóxicos para células do hospedeiro. As plantas constituem importantes fontes de compostos bioativos, entre os quais podemos citar as lectinas, uma classe de proteínas ligadoras de carboidratos cuja ação antimicrobiana tem sido reportada. SteLL é uma lectina isolada de folhas de Schinus terebinthifolia Raddi (Anacardiaceae) com ação antimicrobiana previamente relatada. Neste trabalho foi avaliado o potencial antibacteriano e antibiofilme de SteLL contra isolados de Staphylococcus aureus, sensível (UFPEDA 02) e resistente a oxacilina (UFPEDA 670). STeLL foi agente bacteriostático e bactericida para os isolados UFPEDA 02 e UFPEDA 670 com CMI (Concentração Mínima Inibitória) de 12,5 e 25 μg/mL e CMB (Concentração Mínima Bactericida) de 50 e 100 μg/mL, respectivamente. A cinética de crescimento das células tratadas com SteLL revelou que houve inibição do crescimento de forma dose-dependente em relação ao controle. SteLL causou alterações morfométricas em células de S. aureus e inibiu a formação de biofilme de UFPEDA 02 nas concentrações entre 400 e 25 μg/mL e de UFPEDA 670 entre 400 e 100 μg/mL. Em conclusão, SteLL é um agente antibacteriano contra Staphylococcus aureus por inibir o crescimento, promover morte celular e inibir a formação de biofilme bacteriano.Item Prospecção da atividade antimicrobiana de polissacarídeos extraídos das paredes celulares das leveduras Kluyveromyces marxianus, Kluyveromyces lactis e Saccharomyces cerevisiae(2021-02-26) Araújo, Isabelle Maria Feitosa de; Ferreira, Éder Galinari; http://lattes.cnpq.br/7670722046479986; http://lattes.cnpq.br/5044579569126838Polissacarídeos das mais diversas fontes, podem possuir atividades farmacológicas como, por exemplo, antioxidante, imunomoduladora, anticoagulante e antimicrobiana. Tendo em vista que esta última atividade ainda não foi avaliada, segundo nosso levantamento bibliográfico, para os polissacarídeos de parede celular das leveduras Kluyveromyces marxianus e Kluyveromyces lactis, o objetivo deste estudo foi o de verificar a atividade antimicrobiana de polissacarídeos extraídos das paredes celulares das leveduras Kluyveromyces marxianus CCT7735 e Kluyveromyces lactis CBS2359 e compará-las a uma levedura não-Kluyveromyces como a Saccharomyces cerevisiae CAT-1. Os testes de suscetibilidade foram realizados em placas de Petri (90 x 15 mm) pelo método de disco-difusão de Kirby-Bauer conforme preconizados pelo suplemento M 100 da 29ª edição do Clinical & Laboratory Standards Institute. Dez microlitros da solução de polissacarídeos (10 mg/mL) solubilizados em água destilada e esterilizados por filtração foram depositados sobre os discos de papel estéreis (6 mm). Os polissacarídeos foram testados frente a Escherichia coli ATCC 25922 (controle positivo: 100/10 μg de piperacilina-tazobactam); Staphylococcus aureus ATCC 29213 (controles positivos: 30 μg de cefoxitina e 10 unidades de penicilina); Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 (controles positivos: 100/10 μg de piperacilina-tazobactam e 10 μg de gentamicina); Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 (controle positivo: 10 μg de gentamicina) e Enterococcus faecalis ATCC 29212 (controles positivos: 30 μg de tetraciclina e 10 unidades de penicilina). Nenhuma das amostras de polissacarídeos de parede celular avaliadas inibiram o crescimento das linhagens de bactérias patogênicas testadas. Desta forma, pelo menos nas moléculas nativas, os polissacarídeos não apresentaram atividade antimicrobiana. Sugere-se que novos estudos sejam realizados com as amostras avaliadas, seja para outras aplicações/atividades farmacológicas ou com a modificação química ou alteração da concentração destes polissacarídeos, seguido de uma nova testagem quanto a atividade antimicrobiana, dentre outras.