Navegando por Assunto "Expressão gênica"

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Análise da expressão do gene da quemerina em tecido placentário de vacas com hipercetonemia
(2024-10-04) Oliveira, Luís Felipe Nogueira Paes Barreto de; Souza, Paulo Roberto Eleutério de; http://lattes.cnpq.br/1971832245117283; http://lattes.cnpq.br/1369593804561817
No período de transição em vacas leiteiras, entre o final da gestação e início da lactação ocorre um aumento da demanda energética, uma maior predisposição a mobilização da gordura corpórea e redução da capacidade digestiva do animal, predispondo-o a diversos distúrbios metabólicos, como a cetose. A quemerina é uma proteína produzida pelo tecido adiposo e está envolvida na adipogênese e nas respostas inflamatórias. O nível circulante de quemerina foi associado ao desenvolvimento de síndrome metabólica em humanos. O presente estudo teve como objetivo analisar a expressão de quemerina em placenta de vacas com e sem hipercetonemia. Foram analisadas a expressão do RNAm em placenta de 26 vacas prenhas, sendo 14 controle e 12 com hipercetonemia oriundas da clínica de bovinos de Garanhuns-PE pela técnica de PCR em tempo real. Os resultados obtidos mostraram que há uma maior expressão da quemerina em vacas com hipercetonemia comparado ao grupo controle (p<0,05). Além disso, houve relação significativa da expressão da quemerina com a quantidade de ácidos graxos não esterificados (p<0,05). Assim, é possível concluir que a quemerina desempenha um papel significativo na cetose e está ligada ao acúmulo de ácidos graxos não esterificados na placenta de vacas, sugerindo que a quemerina pode ser utilizada como um provável biomarcador para a doença.
Análise da Influência do número de cópias na expressão do gene blaKPC
(2021-03-05) Oliveira, Michelly Maria Pereira e; Almeida, Anna Carolina Soares; http://lattes.cnpq.br/4153747599532886
As enterobactérias tem se destacado na prática clínica pela detecção de mecanismos enzimáticos que conferem resistência a antimicrobianos, destacando-se a Klebsiella pneumoniae carbapenemase (KPC) devido a sua rápida disseminação mundial ocasionada pela localização do gene blaKPC em grandes plasmídios transferíveis e transposons. A expressão do gene blaKPC pode ser afetadas por características intrínsecas do hospedeiro que o abriga ou número de cópias. Um fenótipo não usual foi observado em isolados clínicos de P. stuartii e M. morganii e seus respectivos transformantes, onde as células de E. coli receptoras de plasmídeos que carregavam o gene blaKPC, apresentaram valores de CIMs, para alguns beta-lactâmicos, maiores do que nos isolados clínicos. O objetivo deste trabalho foi analisar o número de cópias do gene blaKPC, relacionando-os com seus os respectivos CIMs. O DNA genômico dos isolados bacterianos foi extraído a partir do kit PromegaTM WizardTM Genomic DNA Purification conforme orientações do fabricante, e em seguida, foi quantificado por espectofotometria através do equipamento NanoDropTM Lite da Thermo Fisher Scientific. Os genes de controle endógenos foram escolhidos a partir da literatura depois de uma busca robusta, em seguida foram analisados in silico. Utilizando bancos de dados, softwares e outras ferramentas, os primers foram desenhados. Para a realização da quantificação absoluta, foi realizada uma estimativa baseada em uma proporção da relação quantitativa relativa entre alvo e o controle endógeno, utilizando a fórmula 2-ΔCq. Para os experimentos foi utilizando o equipamento SteponeTM Real-time PCR System (Applied Biosystems) e o corante SYBR Green PCR Master Mix (Applied Biosystems). Os primers desenhados passaram por uma etapa de validação visando avaliar sua eficiência (tufMm - 93.019, tufPs - 90.228 e tufKp - 103.474, ambos com R2próximos de 1). Os dados gerados pelos experimentos de qPCR absoluta foram associados com os distintos perfis fenotípicos observados e a partir dos ensaios foi determinado que o número de cópias do gene blaKPC para os isolados transformantes e para os isolados clínicos não variam significativamente, apontando que outro mecanismo deve estar interferindo na expressão do gene blaKPC, influenciando diretamente os níveis de resistência.
Análise de colinearidade gênica do operon aprX-lipA em isolados de Pseudomonas fluorescens
(2023-09-15) Silva, Israel Santos da; Freitas, Nara Suzy Aguiar de; Souza, Paulo Roberto Eleutério de; http://lattes.cnpq.br/1971832245117283; http://lattes.cnpq.br/6891650997818766; http://lattes.cnpq.br/9803828236017805
Pseudomonas fluorescens são bacilos gram-negativos que possuem motilidade e estão presentes em ecossistemas terrestres e aquáticos. Por possuírem característica psicrotrófica, essas bactérias estão frequentemente relacionadas à contaminação de leite não pasteurizado e seus derivados, como queijo e manteiga. As proteases e lipases produzidas por P. fluorescens são o principal fator na prevalência de contaminação de produtos lácteos. Essas enzimas são codificadas pelos genes aprX e lipA, presentes no operon aprX-lipA. Nesse sentido, avaliamos os componentes genômicos circunvizinhos ao operon aprX-lipA de P. fluorescens de diferentes origens, visando detectar padrões genéticos inerentes a esses organismos e sua correlação com a atividade proteolítica. Utilizamos o banco de dados do NCBI, a plataforma String e Interpro para avaliação comparativa dos genomas selecionados. Nos quatro isolados analisados o operon aprX-lipA é altamente variado, estruturalmente, com configurações exclusivas para cada genoma. As relações de co-expressão gênica dos genes circunvizinhos à protease aprX, também, apresentam variações qualitativas e quantitativas, intra e inter-espécies do gênero Pseudomonas. Detectamos os componentes do sistema CRISPR tipo 1, até então não relacionado com o operon, que podem amplificar, movimentar e modificar genes relacionados com o mecanismo de defesa, patogênico ou não, do gênero. Os padrões relacionados à patogenicidade indicam que novos biomarcadores podem ser utilizados pela vigilância genômica.
Identificação e caracterização de receptores de β- 1, 3 - Glicanas (βGRPs) em Diatraea saccharalis (Lepidoptera: Crambidae)
(2023-04-25) Silva, Letícia Fernanda Brilhante da; Souza Junior, Dijair Antonino de; Souza, Felipe Marinho Coutinho de; http://lattes.cnpq.br/0380292673553843; http://lattes.cnpq.br/9268515833435844; http://lattes.cnpq.br/8269521238287201
Em insetos existe um grupo de proteínas reconhecedoras de padrões moleculares (PRRs), que reconhecem padrões moleculares associados a patógenos-PAMPs. No caso de PRRs que possuem o domínio GH16 temos as GNBPs /βGRPs que podem reconhecem fungos e bactérias em maior ou menor especificidade, dependendo da proteína e da espécie. As GNBPs/βGRPs possuem o domínio GH16 C-terminal, porém sem os aminoácidos catalíticos, e um domínio de ligação a carboidratos (CBM) na região N-terminal. Além disso, GNBPs/ βGRPs podem iniciar a sinalização da resposta humoral em duas rotas específicas: (i) a via Toll, que pode combater infecções de fungos e bactérias gram-positivas (melhor caracterizada em Drosophila), e (ii) a melanização ativada pelo sistema de profenoloxidases ou PPOs (especialmente em Lepidoptera). O objetivo deste estudo foi identificar e caracterizar in sílico, as proteínas βGRPs, que possuem o domínio GH16 em Diatraea saccharalis . A broca da cana-de-açúcar, importante praga desta cultura, e avaliar a expressão destes genes quando lagartas foram infectadas por patógenos naturais como o fungo Metarhizium anisopliae . Foram identificados 4 genes com domínio GH16 em um transcritoma intestinal de D. saccharalis . DsGH16_c10227 , provável β-1,3 glucanase, e DsGH16_c12479 , DsGH16_c28729 e DsGH16_c32367 , prováveis βGRPs, de acordo com a arquitetura de domínios e relações filogenéticas. Confirmando estes dados, DsGH16_c10227 foi mais expresso no intestino, e DsGH16_c28729 na carcaça (epiderme, corpos gordurosos e hemolinfa). Então, de forma surpreendente, DsGH16_c28729 e DsGH16_c32367 foram regulados negativamente 24 h após o início da infecção de M. anisopliae por via tópica. Existem pelo menos duas hipóteses que podem explicar esses resultados. Uma é que os tempos avaliados foram muito tardios e que a resposta de indução pode ter ocorrido mais cedo, embora ainda não justifique uma regulação negativa dos genes. A segunda hipótese é que o fungo pode produzir algum fator de virulência que reprime a expressão de genes de resposta à infecção. Entretanto, ambas as hipóteses precisam ser testadas em trabalhos posteriores.
Sala de aula invertida para a construção e articulação de conceitos bioquímicos
(2021-02-26) Gomes, Isabela Lemos; Couto, Janaína de Albuquerque; Cordeiro, Priscila Aparecida dos Santos; http://lattes.cnpq.br/1352379618124390; http://lattes.cnpq.br/7709040837130788; http://lattes.cnpq.br/9160682195907995
A Bioquímica tem despontado nos últimos anos como objeto de discussões no meio acadêmico por conta das dificuldades presentes no processo de ensino e aprendizagem. Essas dificuldades são mais acentuadas quando o professor pauta sua prática pedagógica no ensino tradicional. Diante desse contexto, surge a necessidade de os professores buscarem novos caminhos e novas metodologias de ensino que foquem na interação entre os sujeitos, no protagonismo, na postura crítica e na autonomia dos estudantes. A Sala de Aula Invertida é caracterizada como uma abordagem pela qual o discente deve estudar previamente o conteúdo, servindo a sala de aula presencial como ampliação e aplicação prática dos conceitos estudados. Diante do exposto, a presente proposta metodológica teve como objetivo desenvolver uma ação pedagógica inovadora para a construção de conceitos bioquímicos através da Sala de Aula Invertida. A pesquisa foi realizada numa turma do curso de Bacharelado em Ciências Biológicas de uma Universidade Pública, onde foi feito o acompanhamento por meio de presença nas aulas, registro das atividades através de anotações em caderno de campo e coleta do material produzido na intervenção. Mediante a apresentação e assinatura do Termo de Consentimento Livre e Esclarecido (TCLE) por parte da docente, foi realizado o acompanhamento das intervenções. Assim sendo, foi planejada uma sequência de ações pedagógicas para trabalhar o conteúdo Expressão Gênica, o qual é abordado na disciplina de Bioquímica. A ação foi precedida pelo levantamento das concepções prévias dos estudantes, seguindo-se as demais etapas por meio da Sala de Aula Invertida, utilizando o Ambiente Virtual de Aprendizagem institucional, sendo o processo avaliado por meio de produções coletivas e individuais. Os resultados foram analisados, a fim de avaliar o processo de construção de conceitos acerca do conteúdo específico.